1微生物實(shí)驗室基本設備的質(zhì)控要求

(1）孵箱：根據需要設置溫度，可調溫度范圍應由室溫至60℃。孵箱溫度允許的波動(dòng)幅度為設置溫度±1℃，如一般細菌培養，孵箱溫度應為35℃±1℃。應每天記錄孵箱溫度，定期加水，每月清潔內壁和架子。
（2）冰箱和低溫冰箱：普通冰箱允許溫度為4℃±2℃，每天記錄溫度，并定期清潔。盡量減少冰箱開(kāi)啟次數，減少溫度的波動(dòng)。低溫冰箱控制溫度－20℃±5℃，每天觀(guān)察溫度并記錄，每隔3個(gè)月除霜1次。一旦溫度失控，及時(shí)調整。

（3）水浴箱：根據需要設置溫度，允許的溫度波動(dòng)幅度為0.5℃，每日檢查水位，記錄溫度。每月擦拭箱體內部并換水。

（4）高壓滅菌器：控制溫度121℃，每次使用前觀(guān)察并調整水位，記錄使用時(shí)間、溫度或壓力。每周用嗜熱芽孢桿菌檢測滅菌效果，每月清理內部及換水，并定期檢測密封圈的密封效果。

（5）二氧化碳培養設備：常用的有二氧化碳箱和蠟燭罐，要求二氧化碳濃度為5％～10％，箱內或罐內保持濕度，并用淋病奈瑟菌作培養效果監測。

（6）厭氧培養設備：主要有厭氧箱、厭氧罐、厭氧袋?；旌蠚怏w組分要求二氧化碳10％、氫氣10％和氮氣80％。厭氧箱與厭氧罐內部要每周清潔，定期更換催化劑。每次使用培養設備均應用美藍指示劑或銅綠假單胞菌檢測厭氧效果。
（7）天平：保持刀刃光滑而鋒利、稱(chēng)盤(pán)清潔，并定期校正。

（8）pH計：要求誤差不超過(guò)0.02，并定期校正。

（9）顯微鏡：最常用的是光學(xué)顯微鏡，應注意保護油鏡。每次使用后應用擦鏡紙擦去油鏡頭上的鏡油。每天工作結束后，應用含少量（或酒精）的擦鏡紙擦拭油鏡，再用潔凈擦鏡紙擦干。另外，微生物學(xué)實(shí)驗室還用到暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡等，均應按規程清潔和保養。

（10）玻璃器皿：微生物學(xué)實(shí)驗室所用試管、吸管、平皿等應潔凈無(wú)菌，不殘留酸堿。

（11）接種器具：分為接種針和接種環(huán)兩種。應選用傳熱散熱快、耐用和不生銹的材料，早先使用的白金絲由于價(jià)格昂貴，目前多用比較經(jīng)濟的鎳鉻絲代替。一般要求接種環(huán)長(cháng)5～8cm、直徑2～4mm，定量接種環(huán)要定期校正其容量，接種針長(cháng)5～8cm。

微生物實(shí)驗室設備控制標準保養及監測
高壓滅菌器溫度≥121℃每次用前換水；每月清潔1次。
孵育箱溫度35℃±1℃每天記錄溫度；每月清潔內壁和隔板。
水浴箱溫度37 ℃±0.5℃每天記錄溫度；每月擦內壁和換水。
冰箱溫度4℃±2℃每天記錄溫度；保持清潔并定期除霜。
低溫冰箱溫度－20℃±5℃每天記錄溫度；保持清潔并定期除霜。
二氧化碳培養箱:二氧化碳5％～10％,每天記錄溫度；定期換水；用淋病奈瑟菌監測效果。
厭氧培養箱:二氧化碳10％、氫氣10％、氮氣80％,每次使用時(shí)用厭氧指示劑監測效果。
微生物標本采集、運送與處理原則
標本的正確采集、運送與處理對于細菌的培養、鑒定，有著(zhù)十分密切的關(guān)系。

一、標本采集
（1）送檢申請單必須惟一標識，并注樣品名稱(chēng)、型號、年月、性狀、標本來(lái)源、采集時(shí)間、檢驗目的及添加物使用情況等，以便實(shí)驗室能針對該標本選用相應培養基和適宜培養環(huán)境，有利于對檢驗結果的綜合評估。
（2）為避免漏檢，確保病原體的檢出，應盡量在抗菌藥劑使用前采集標本。
（3）標本采集時(shí)應嚴格執行無(wú)菌操作，減少或避免機體正常菌群及其他雜菌污染。
（4）以棉拭子采集標本，如拭子，應插入運送培養基送檢。
（5）混有正常菌群的標本，如拭子，不可置肉湯培養基內送檢。
（6）盛標本容器須經(jīng)滅菌處理，但不得使用消毒劑。
（7）實(shí)驗室應制定各種送檢標本的采集、運送、保存等正確方法和注意事項，并應向取樣者詳細介紹如何正確留取和送檢標本。

二、標本運送
標本采集后應立即送至微生物學(xué)實(shí)驗室。標本采集后在室溫下超過(guò)2h未送達實(shí)驗室者可視為不合格標本。生產(chǎn)線(xiàn)邊檢驗可提高病原菌檢出率，送檢標本必須與檢驗申請單有相同的惟一標識。

三、標本驗收
實(shí)驗室只能接收和處理合格的檢驗標本，因此應制定不合格標本拒收標準；對不合格標本應注明原因，退回，并做記錄。
四、標本處理
（1）實(shí)驗室收到標本后，應立即根據標類(lèi)型及檢驗目的，選擇合適的培養基接種。

（2）混有正常菌群的標本，應作定量細菌培養。不能精確定量或常規定量操作較困難的標本，分離出致病菌及條件致病菌為優(yōu)勢菌時(shí)，應作細菌鑒定及藥敏試驗，同時(shí)注明細菌量化指標。

（3）對已用抗菌藥物治療的標本，可在培養基中加入某些物質(zhì)以中和藥物對細菌的抑制作用。
微生物檢驗標本的采集
樣品在使用抗生素前，將標本采集在無(wú)菌容器內，立即送到檢驗科細菌室，特殊檢驗應先與細菌室聯(lián)系，再按要求采集標本，并立即送檢。

（一）樣品的采集：
1.憑檢驗申請單到檢驗科領(lǐng)取血培養瓶。
2.采取樣品部位和血培養瓶口應嚴格消毒。
3.通常一般至少作三次血培養，在抗菌藥已實(shí)施者，更應增加培養次數，懷疑特定菌種一般應一日作三次培養，必要時(shí)需追加次數。
4.應在生產(chǎn)高峰時(shí)采集。
5.對疑為細菌性污染的產(chǎn)品，嚴格消毒后抽取2～3 ml作增菌培養。
6.每次采樣量5-10ml，培養基與樣品之比以10∶1為宜，以稀釋樣品中的菌物質(zhì)。
7.采樣過(guò)程應嚴格無(wú)菌操作，避免污染。

微生物實(shí)驗室培養基質(zhì)量控制
一、配制時(shí)的質(zhì)量控制
（1）容器：配制和分裝培養基的燒瓶、平皿或試管等器材應為中性，無(wú)酸、堿抑制物殘留，平皿底部要平，以免瓊脂厚薄不一，影響藥敏試驗結果。

（2）成分來(lái)源：各種成分來(lái)源可靠，不含對目的菌生長(cháng)有抑制的物質(zhì)。特殊要求的培養基，如葡萄糖氧化發(fā)酵試驗（O／F 試驗），除加入葡萄糖外，不能含有其他糖類(lèi)，指示劑不能用乙醇溶液，避免O／F試驗的假陽(yáng)性。培養基配制用水應是蒸餾水。

（3）pH值調整：根據培養基的不同要求調整pH 值，控制在要求范圍的±0.2之內。應當注意，培養基在高壓滅菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矯正時(shí)應比實(shí)際需要p H值高0.1～0.2。

（4）滅菌：根據培養基所含成分及配制數量的不同，選擇不同的滅菌方式，既要達到滅菌效果，又不破壞培養基成分。一般對穩定的培養基，如MH瓊脂、營(yíng)養瓊脂可用高壓滅菌，即121℃15min ；而含糖的培養基則以108℃滅菌為好，以防止糖類(lèi)破壞。不耐高熱的物質(zhì)如血清、牛乳等，可采用間隙滅菌法滅菌。

（5）分裝：根據使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養基所用的平皿、試管要求清潔，不殘留酸堿；制備平板培養基時(shí)，操作臺要水平，以避免瓊脂平板厚薄不一，同時(shí)確保無(wú)菌操作。

二、配制后質(zhì)量控制
（1）培養基外觀(guān)情況：包括顏色、透明度、有無(wú)沉淀和凝固。如發(fā)現培養基表面有裂紋或與培養皿的邊緣分離，說(shuō)明培養基有脫水現象，必須丟棄。

（2）無(wú)菌試驗：每一批配好的培養基均須進(jìn)行無(wú)菌試驗。先滅菌后分裝的培養基，可采用抽樣方法試驗，少于100個(gè)樣本通常選取5％～10％的量，如果配制大量培養基，則任意選取10個(gè)培養基；無(wú)菌分裝培養基則需全部做無(wú)菌試驗。樣本在35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養，如培養基含有血液，則需再置于室溫1天，以檢查嗜冷菌。選擇性培養基因含有抑制物質(zhì)，能抑制許多微生物，因此，可加入10倍量的無(wú)菌液體培養基，稀釋抑制物質(zhì)，以利于檢出污染菌。即使做過(guò)無(wú)菌試驗，接種時(shí)，也要檢查每個(gè)平板上的可見(jiàn)菌落。

（3）性能測試：每一批新制或新購的培養基，使用前均須取已知性質(zhì)的庫存菌種進(jìn)行性能測試。培養基按目的不同可分為增菌培養基、分離培養基和鑒定培養基。

①增菌培養基：接種少量難以生長(cháng)的細菌，在一定時(shí)間內觀(guān)察增菌情況，細菌能生長(cháng)的最小接種濃度越小，說(shuō)明增菌培養基性能愈好。

②分離培養基：要求目的菌生長(cháng)良好，非目的菌被抑制。一般要求生長(cháng)的目的菌接種量不可過(guò)多，較好的方法是將測試菌調成0．5麥氏濁度的菌懸液，再用0.001ml的標準接種環(huán)涂劃在培養基上，觀(guān)察菌落生長(cháng)。
③鑒定培養基：應選擇具有典型特征的菌株作性能試驗。如三糖鐵瓊脂，須用弗勞地枸櫞酸桿菌、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌3種菌分別接種3支培養基，若反應結果為斜面產(chǎn)酸／高層產(chǎn)酸、硫化氫陽(yáng)性，斜面產(chǎn)堿／高層產(chǎn)酸，斜面產(chǎn)堿／高層產(chǎn)堿，質(zhì)量才算合格。
試劑、染色液和血清質(zhì)量控制

一、試劑
各種試劑配好后，均應注明試劑名稱(chēng)、配制日期、有效期及配制者，并作記錄，商品試劑亦應注明購入日期及有效期。配制好的試劑均應用標準菌株作性能測試，不合格者不能使用。性能測試間隔可根據試劑的穩定性和使用頻率而定，如氧化酶試劑每天用前測試，靛基質(zhì)試劑每周測試1 次。試劑須根據不同要求作適當的貯存，如氧化酶試劑應置棕色瓶中4 ℃冰箱保存。

二、染色液
常用染色液如革蘭染色液在每次配制后并常規至少每周檢測1次，用標準菌株金黃色葡萄球菌（ATCC25923）和大腸埃希菌（ATCC 25922）作陽(yáng)性和陰性檢測。不常用染色液（如鞭毛染色液）應于每次使用前，用已知特征的菌株作檢測。
3.診斷血清
診斷血清的使用和保存必須按說(shuō)明要求執行，一般置4℃冰箱貯存，且不得暴露室溫過(guò)久；使用前應注意有效期及效價(jià)，第一次使用抗血清時(shí)應用相應的菌株檢查其有效性，以后每月檢測1次。如抗血清出現任何顏色的改變或混濁，即不能使用。

微生物實(shí)驗室檢驗標本及檢驗結果質(zhì)量控制
一、微生物檢驗標本質(zhì)量控制
正確采集和處理標本是實(shí)驗室檢查獲得正確結果的前提，目前仍有不少實(shí)驗室和檢驗人員對檢驗標本分析前質(zhì)量控制的重視不夠。對標本采集方法和時(shí)間、標本來(lái)源，實(shí)驗室人員雖然不能直接控制，但有責任人員正確采集標本，可采取集中講課、個(gè)別輔導作取標本示教等方式給予指導。同時(shí)控制影響檢驗質(zhì)量的其他因素，如檢驗標本的運送、儲存和處理等，均應統一按正確的操作規程執行。